1樓：sky楊錦林
你好，提取總蛋白需要蛋白酶抑制劑和裂解液。一般是1：1進行配製。
用的裂解液我們是ripa。 將組織用液氮研磨碎了，然後按量加入裂解液，細胞量在10七次方左右是100微公升。冰浴裂解20分鐘（間斷搖動）。
然後4攝氏度離心12000rpm，15分鐘。
2樓：天蠍的心馳神往
取脂肪組織：1）附睪脂肪組織：在下腹部找到小鼠**，用鑷子將其提起，附著於其上的白色脂肪為附睪脂肪，沿輸精管將其剝離至**末端後剪下。
2）腹股溝脂肪：用眼科剪於小鼠後肢**與肌肉間鈍性分離，剪刀尖端頂住**以避免切斷皮下脂肪，然後縱切**暴露腹股溝脂肪，剝離其中的腹股溝淋巴結，將脂肪組織剪下。3）棕色脂肪：
剪開肩胛骨下**，暴露肩胛區可見呈蝴蝶狀對稱棕色脂肪組織，去除覆蓋其表面的部分白色脂肪組織後將其取下，將肩胛骨翻開亦可見其內側棕色脂肪組織，用彎鑷掛下。以上所有脂肪組織一經取下後於冰冷生理鹽水中漂洗，去除毛髮、血跡，依實驗目的或凍存於液氮中或裝入包埋盒中儲存於10%中性甲醛中。
如何提細胞的組蛋白做western blot？
3樓：匿名使用者
通過有機溶劑或水溶法製備總蛋白
水溶液提取法
針對水、稀鹽、稀酸或鹼溶液中的蛋白質。稀鹽和緩衝系統的水溶液
對蛋白質穩定性好、溶解度大、是提取蛋白質最常用的溶劑 。
細胞裂解液： 50 mmol/l tris-hcl, 150 mmol/l nacl ,5 mmol/l edta, 1%np40 ， 0.05% pmsf ， 2μg/ml aprotinin, 0.
5μg/ml leupeptin ， ph8.0
有機溶劑提取法
對於分子中非極性側鏈較多的蛋白質可用有機溶劑提取，包括乙醇、
丙酮和丁醇等。
通過層析或電洗脫法製備目的蛋白
bradford法
考馬斯亮藍g-250有紅、藍兩種不同顏色的形式，在一定濃度的乙醇和酸性條件下，可配成淡紅色的溶液，與蛋白結合後形成藍色化合物，該化合物在595nm處有最大吸收值，化合物顏色深淺與蛋白的濃度高低成正比 。(上樣量)
試劑：考馬斯亮藍工作液，0.1n鹽酸，雙蒸水，蛋白標準液（ 將10mg/ml蛋白溶液稀釋至4.
0mg/ml, 3.5mg/ml, 3.0mg/ml, 2.
5mg/ml, 2.0mg/ml, 1.5mg/ml, 1.
0mg/ml, 0.5mg/ml。）
sds 是一種離子性的介面活性劑,它有強離子性的硫酸根離子也帶有疏水
性的長碳鏈.當 sds 與蛋白質混合時,它會以其碳鏈與蛋白質之疏水性胺
基酸結合將蛋白質包起來,而以硫酸根離子外露與水分子作用.大多數蛋
白質和 sds 的平均結合量是 1:1.4 (以重量為單位),而蛋白質結合固定
比例之 sds 後,由於 sds 帶強負價,使蛋白質原先的帶電價微不足道,且
每單位重量之蛋白質帶電價一致 (charge density),所以決定不同蛋白的泳動速率就只剩下分子大小一項因素
把硝酸纖維素濾膜放在密閉塑膠袋或者培養皿中，根據濾膜面積以0.1ml/cm2的量加入加入一抗溶液與濾膜溫育。37℃一小時，4 ℃過夜。
倒掉一抗溶液，用pbs漂洗液濾膜3次，每次10min。
加入用封閉液配製的二抗，搖床上緩慢搖動， 37℃一小時，4 ℃過夜。
倒掉一抗溶液，用pbs漂洗液濾膜3次，每次10min
4樓：匿名使用者
差速離心先分離出細胞核，然後可以抽總核蛋白做wb。錢多的話有專門的試劑盒提組蛋白的。
5樓：
幹嘛非要提組蛋白呢？直接提取細胞總蛋白，然後用組蛋白的抗體檢測就是了，裂解液就用一般的就是了
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