ml的蛋白酶K,對細菌基因組DNA的PCR反應有影響嗎

時間 2021-09-13 15:43:43

1樓:兵兵王

會的。酶促反應很快,何況蛋白酶k的最適溫度是55度。這樣的話 從你加入taq開始 蛋白酶k就從室溫開始作用了,直到70度以上失去活性而停止,有無taq殘留 要看你加樣後多長時間上機的。

電泳圖分析:我個人認為你的所謂的“好帶”(1-2泳道)不見得是理想的。因為你根本沒有提取到基因組dna,從分子量判段 只是一個小的質粒,很純,很好。

基因組dna特點:因為大,所以在提取中常常會有降解造成拖帶。此外基因組很大,一般不用電泳方法判斷。

你的結果中,5、8、4、6 按順序都可看到基因組dna(最上邊的——其實是smear 很寬的)。 1-2泳道基因組dna也有 但不如5、8 道。5道中的小分子 可能是rna.

在56°水浴2h後(蛋白酶k工作),大多有“ 95°水浴10-15分鐘”一步(滅活蛋白酶k),這一不應該是要的。

2樓:浙大阿米巴

雖然蛋白酶k的到了65℃以上就迅速變性,而且pcr第一步94℃預變性的時候就足以破蛋白酶k的活性。但問題是你加模板直到pcr儀升溫到蛋白酶變性這段時間taq暴露在有活性的蛋白酶k之下,咋辦?

哥教你個更省力的方法,菌體離心除去培養基,無菌水漩渦振盪懸浮,丟進沸水浴中煮半小時,完了迅速丟進-20℃冰箱,冰凍後拿出來化凍,離心機甩一下,沉澱掉菌體碎片,取上清就作為模板進行pcr。

你不就是做個pcr麼?根本不用跑什麼dna模板的電泳,模板質量那麼**嘛?你想想為啥pcr怕汙染,假陽性?

就是因為它比較靈敏,靈敏的東西你何必給他高質量的模板?降解就降解了,你的那一小段基因總有點保留下來的。

上面這種耗時不到一小時的方法做的模板我從來沒跑出模板dna條帶,但是跑16s rdna(1.5kbps)的pcr就是能跑出來。

3樓:匿名使用者

蛋白酶k的活性還是很強的,需要85度1小時滅活。

如果不滅活直接做pcr,聚合酶活性會被蛋白酶k所抑制。

建議你做pcr之前將含蛋白酶k的dna模板於水浴85度滅活1小時。這是我們實驗室攝取基因組dna的方法。有時候實驗忙,我水浴過2小時3小時,pcr都沒有問題。

此過程dna模板可能會有些降解,但對於做一般幾百bp一兩kb的pcr沒什麼影響。

有一兩次我忘了85度滅活,pcr就p不出來任何東西,說明蛋白酶k的滅活是需要一定時間的,想依靠pcr剛開始那幾分鐘的95度高溫是冒險的。

4樓:

模版裂解不會影響你的pcr,但是你的蛋白酶k會影響你的pcr,因為在你加入dna聚合酶後,在放在pcr儀上之前就會被蛋白酶k降解,你說有沒有影響。的確在pcr反應的第一步蛋白酶k就被滅活了,但是你的聚合酶在這之前就over了。

5樓:匿名使用者

提dna的時候不就把所有蛋白質都去掉了嗎?另外你為什麼體系裡會有蛋白酶k呢?而且還知道濃度。

基因組dna跑是很簡單的,正常的都能跑出來。

6樓:匿名使用者

如果要用蛋白酶的話最好還是先滅活。

首先看你實驗的細菌是陰性菌還是陽性菌。

陰性菌:從培養皿上直接挑單菌落活化,按1:100重新培養,在對數生長期前取出,低速離心,取細胞用去離子水洗2次,加入離心前菌液體積5倍的水稀釋混勻,直接用作pcr模板,這樣可以保證基因組dna的完整,一般情況可以擴增出想要的片段。

陽性菌:只能按照傳統的鹼裂解法或者高鹽法等方法提取了dna再pcr。

生物學教育屬於理工類專業嗎?

7樓:匿名使用者

也就是師範類生物專業,大學的理化生地理都是理科

8樓:群

生物科學專業包括了生物科學和生物技術兩個專業方向,這些專業學科主要培養學生學習生物科學技術方面的基本理論、基本知識。

單獨的生物系屬於理科,自然科學6大學科之一,畢業後是理學學士。

但是有很多生物相關專業是屬於工科專業,例如生物工程,生物資訊科技,生物化學工程之類的專業。

9樓:匿名使用者

有需要環保油配方的可以158聯絡0747我2568**便宜**,我是做餐飲行業的根本沒有時間做這個。出價就賣

山東理工大學生物科學怎麼樣

10樓:在水一方

挺好的排第十、生物科學

11樓:點射少尉

現在是不是已經知道被什麼專業錄取了啊,,,,既來之則安之,,好好學習吧,,

學哥到此一遊

12樓:匿名使用者

生物實力不錯,考研率也可以,但是生物專業不好就業,全國生物都是這種情況,自己考慮考慮吧,真喜歡的話就報吧,走學術這條路

美國佐治亞理工學院生物學專業怎麼樣

13樓:北京再來人

佐治亞理工學院簡稱 georgia tech,1885 年建校,是美國top理工學院,排名僅次於麻省理工學院和加州理工學院。學院在校學生共約 20,000 名,教授近千名。該校以工程學聞名世界,其工程學院是全美最優秀的工程學院之一。

要求:gre成績,平均v538+q763+a692;託福600/250/100;本科為工程學或生命科學,正是開始博士課程前需要完成1年的微積分基礎物理和一學期有機化學。

特色:博士課程;秋季入學。

14樓:匿名使用者

選校或者選專業定位可以 參考留學志願參考系統

com/group/topic/103972780/,輸入gpa、專業等資訊,系統會自動從資料庫中匹配出與你情況相似的同學案例,看看他們成功申請了哪些院校和專業,也可以按照留學目標來查詢,看看你的目標院校和專業都哪些背景(語言成績多少分、學校背景如何、什麼專業、gpa多少等)的學生申請了,也從而對比自身情況,制定大致的目標和方向。

15樓:匿名使用者

你可以先做一個簡單的定位,看看別人和你情況類似的同學申請的什麼學校什麼專業,對比一下選擇適合自己的。

16樓:匿名使用者

佐治亞理工學院(georgia institute of technology,簡稱georgia tech,也常縮寫為gatech),成立於2023年,位於美國佐治亞州首府亞特蘭大市,與艾茉莉大學同處一個城市。原名為佐治亞技術學校,2023年,為了體現學校正在向發展並著重於高等科技和科學研究型大學的方向,佐治亞技術學校更名為佐治亞理工學院。與其他有著類似命名的高等學府(如麻省理工學院與加州理工學院)不同,佐治亞理工學院是一所公立大學。

華東理工的生物化學與分子生物學專業怎麼樣?

17樓:愛笑的掰玉米

從研究生現在的客程上來看,基本也差不多的。

如果考專業課選生物化學的話,兩個專業的題目會略有不同,數學方面沒有什麼大問題,很多同學原來都是學理科的,專心複習數學後成績非常理想。乘現在大三,如果大四有空的話可以去旁聽線形代數,而且考試的內容也就那些要點。

這兩個專業的研究生課程有很多是一樣的。而且有些即使專業上未要求的課程,如果有興趣,也是可以旁聽的。

關於興趣方面其實還是很好解決的。到時可以在選擇導師方面慎重考慮。很多導師兼收生物化工和分子生物學的。這樣的話就意味著最終能“殊途同歸”,在選擇課題的時候和導師商量做想做的方向。

18樓:碎花小傘

要說這兩個專業在華理的情況,當然是生物化工硬多了。從研究生現在的客程上來看,基本也差不多的。如果考專業課選生物化學的話,兩個專業的題目會略有不同,從往年的情況來看,出題的張教授總會在題目上對分子生物學的考生增加難度,提出更高要求。

2023年就是一個非常典型的例子,結果很多生物化工的人都被調劑到了分子生物學,而分子生物學因為很多人分數不夠而落榜。數學方面沒有什麼大問題,很多同學原來都是學理科的,專心複習數學後成績非常理想。乘現在大三,如果大四有空的話可以去旁聽線形代數,而且考試的內容也就那些要點。

這兩個專業的研究生課程有很多是一樣的。而且有些即使專業上未要求的課程,如果有興趣,也是可以旁聽的。

關於興趣方面其實還是很好解決的。你到時可以在選擇導師方面慎重考慮。很多導師兼收生物化工和分子生物學的。

這樣的話就意味著你最終能“殊途同歸”,在選擇課題的時候和導師商量做你想做的方向。

成都理工大學的生物專業怎麼樣啊?

19樓:

這個專業很好的哦,下面誰介紹:

本專業培養掌握現代生物技術及其產業化的科學原理、工藝技術過程和工程設計等基礎理論、基本技能,能在生物技術與工程領域從事設計、生產、管理和新技術研究、新產品開發的工程技術人才。學生主要學習微生物學、生物化學、基因工程、發酵工程等方面的基本理論和基本知識,受到生物技術與工程等方面的基本訓練,具備在生物技術與工程領域從事設計、生產、管理和新技術研究、新產品開發的基本能力。

生物工程專業設有生物化學工程方向,主要專業課程:細胞生物學、遺傳學、生物化學、分子生物學、現代生物技術、微生物學、發酵裝置、基因工程、蛋白質與酶工程、生物治理工程、生物礦業工程、生化分離工程等。

本專業學制四年,具有工學學士學位授予權。學生畢業後能從事相關的科學研究、教學和管理工作,也可在工業、醫藥、食品、環保、園林和農、林、牧、漁等行業從事與化學化工、生物工程相關的應用研究、技術開發、工程技術及管理等工作。

“應用化學”與“分析化學”學科具有碩士學位授予權,“化學工程”學科具有工程碩士學位授予權,“地球化學”學科具有博士學位授予權

麻省理工學院生物的研究生有哪些專業,博士呢?

20樓:北京再來人

麻省理工學院博士熱門專業

生物、化學、數學、物理、微生物學、生物化學、細胞生物學、遺傳學、神經生物學、計算機和系統生物學、生物物理學、科學、技術與社會、發展生物學、原子材料和工程、地球大氣和行星學、腦與認知科學、生物工程-生物與生理輸送現象、生物工程-生物力學、生物工程-致癌作用、生物工程-計算機生物與生物資訊學、生物工程-遺傳毒理學、生物工程-基因組學-蛋白質組織學與醣體學、生物工程-大分子生物化學與生物物理學、生物工程-藥物與毒素的新陳代謝、生物工程-微生物發病機理、計算、材料科學與工程-生物與高分子材料、材料科學與工程-材料的電子與機械性質、材料科學與工程-動力學、材料科學與工程-材料加工、材料科學與工程-材料結構、材料科學與工程-熱力學、幹細胞、人類基因組等。

大連理工大學生物學這個專業怎麼樣?

21樓:繆玉枝愚鶯

大連理工的生物,一般吧....我是大工的,雖然不是學生物的,生物化工方向不錯...

河南理工大學生物技術專業簡介!

22樓:

生物技術專業

本專業培養適應我國社會主義現代化建設實際需要,德、智、體全面發展,較全面地掌握生命科學尤其是生物科學的基本知識、基本理論和基本技能,具有現代生物技術系統的基礎理論知識以及紮實的實驗技能,熟悉生物技術學科的發展現狀和前沿及其在生產實踐中的應用,具備廣泛的人文社科和經濟管理科學的基本素質,受到科學研究及工程應用雙重技能和素質訓練,在教學、科研、科技開發及管理等方面具有良好素質的高階生物技術新人才。

主要課程:植物生物學、動物生物學、微生物學、遺傳學、生物化學、分子生物學、生物技術原理、基因工程、細胞工程、酶工程、環境生物技術、農業生物技術、食品衛生安全及專業英語等。

學生畢業後,可以到科研院所、高等學校以及食品輕工、環保工業、現代農業等企事業單位或管理部門從事教學、科研、科技開發以及行政管理等方面的工作;還可以到國內外相近學科的教學研究單位繼續深造。

蛋白酶K可以用來消化那些蛋白,蛋白酶K跟蛋白酶有什麼區別?它是幹什麼用的?

proteinase k,中文名為蛋白酶k。不含dnase,不含rnase,進口分裝,可直接使用。可以用於消化各種蛋白。用於各種常見的分子生物學 細胞生物學等相關實驗,例如基因組dna抽提 酶的消化去除等。酶活力,30u mg。在37 以血紅蛋白為底物,1分鐘內可以產生相當於1微摩爾酪氨酸folin...

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