都有哪幾種方法避免載體質粒的自環化

時間 2021-09-04 06:44:25

1樓:

這個要看你是具體如何克隆的

如果你使用的是酶切連線,選擇不同黏末端的酶一般不會發生自身環化如果是平端連線,則需要對載體去磷,也就是鹼性磷酸酶處理。此時需要注意你的插入片段兩邊要有磷酸基團(可以引物合成時新增,也可設計平端的酶如ecorv自己回來切),否則是連不上的。

以前回答過,注意搜尋

2樓:匿名使用者

找切割位點時,讓兩端的黏性末端不同,我只知一種。幫你查過具體可採用以下方法:

(1)用鹼性磷酸酶處理限制酶酶解產生的線性載體分子。鹼性磷酸酶可除去線性載體dna 分子的5¹-磷酸,而留下3¹-羥基基團。經過鹼性磷酸酶處理的線性載體分子,除非插入外源dna 片段,否則就不能重新環化為有功能的載體分子。

(2)採用同聚物加尾連線技術,可自動防止線性載體dna 分子的自身環化作用,這是因為切割後形成的線性dna 分子的兩個3¹-oh末端,此時都已被加上具有同樣鹼基結構的同聚物尾巴。

(3)應用柯斯質粒,也可防止質粒dna 分子發生自身環化作用。需要指出的是,在連線反應中,正確配載入體dna 與外源dna 間的比例,是高效獲得重組體的一個重要因素。在應用λ噬菌體或柯斯質粒作載體時,如果配置高比值的載體dna /外源dna 的連線反應體系,就有利於重組體分子的形成;在應用質粒作載體時,因為其重組體分子是由一個載體分子和一個外源dna 片段環化而成的,所以當載體dna 與外源dna 的比例為1時,最有利於重組體分子的形成。

基因工程裡,用兩種不同的限制酶一起切割質粒和含目的基因的dna,可以防止質粒和目的基因自身環化,那

3樓:棄療的梅大鳥

取下一段目的基因要切兩次,也就是說這裡切的兩次可以

分兩種不同的酶來切,同回樣的,載體也需要切兩次同樣也答是用這兩種酶來切,這樣有兩組鹼基的互補配對,就可以避免載體和載體配對以及目的基因和目的基因配對。(不太確定啊。。。。。)

4樓:

限制性內切bai酶識別特定的酶切位點,

du作zhi用於dna分子鏈上磷酸二酯dao鍵,同種限制酶才回能切割出相同的粘性答末端。連線時,相同的粘性末端通過鹼基互補配對,在dna連線酶的作用下形成磷酸二酯鍵。基因工程的主要步驟:

1、目的基因的獲得;2、目的基因與表達載體的連線;3、表達載體向宿主的轉化。

質粒載體的四個基本特徵

5樓:匿名使用者

條件:①要具有限制酶的切割位點②要有標記基因(如抗性基因)以便於重組質粒的篩選③能夠在宿主細胞中穩定存在並複製④是安全的對細胞無害

6樓:匿名使用者

1,有多個限制酶切割位點;具有標記基因;能在宿主細胞中自主複製;不損害宿主細胞

2,不知道什麼是基因克隆..這個是基因工程的步驟....

獲取目的基因;把目的基因匯入載體;把載體匯入受體細胞;目的基因的檢測與表達

3,4 123來不及回答的很好`

我只是補充一下,1,2條是在生物書上的..自我感覺比他的稍準確點..嘿嘿``

7樓:123來不及

1 具有自我複製的能力;有1到多個限制酶切割位點;有標記基因(抗藥性基因);對宿主細胞無害

2 獲取目的基因;構建表達載體;匯入受體細胞;對目的基因的檢測和鑑定

3 一個羊的體細胞的細胞核取出,放入另一隻羊去核的卵細胞中,將這個新組建的細胞放入第三隻羊的子宮內,生出的小羊就是“多莉”。這是利用核移植技術進行的克隆。

4 比如轉基因技術培育的抗蟲棉,可以提高棉花對害蟲的抵抗能力,這是對人類有利的;但如果將克隆技術濫用的話,可能產生很多社會法律方面的糾分。

學文的不需對這一部分做深入瞭解。必修二中對基因工程有一些初步介紹,只把那個搞清楚就行了。

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