如何去除質粒中的內毒素,為什麼提質粒用去除內毒素試劑盒

時間 2021-09-04 06:44:25

1樓:故事還長

內毒素,即脂多糖或lps,是革蘭氏陰性菌(如大腸桿菌)細胞膜的組成部分。細菌外膜的外層脂質部分是完全由內毒素分子所構成的。單個大腸桿菌細胞約包含兩百萬個lps分子,每個lps分子由疏水的脂質a(lipid a)部分、複雜的糖類殘基陣列部分及負電性的磷酸基團所組成。

因此,每個內毒素分子都具有疏水域、親水域和電荷域,這使它在與其他分子相互作用時具有其獨特的自身性質。細菌在其活性生長期向其周圍微環境中散佈少量的內毒素,在死亡時則釋放大量內毒素。

在質粒製備的細菌細胞裂解過程中,內毒素分子被從外膜釋放到溶菌液中。

去除內毒素

獲得專利的endofree plasmid製備方法在標準的qiagen plasmid純化方案中整合了對內毒素的去除步驟。使用qiafilter cartridge過濾中性的細菌裂解液,並加入專門的不含內毒素緩衝液(緩衝液er)在冰上進行共同孵育。不含內毒素緩衝液能夠避免lps分子與qiagen-tip中的樹脂結合,從而使每微克質粒dna中含有的內毒素少於0.

1eu。

2樓:匿名使用者

現在有很多便捷的試劑盒啦,幫助實驗室科研人員節約大量寶貴的時間,選成熟可靠的biog去內毒素質粒提取試劑盒就可以解決您的問題。

為什麼提質粒用去除內毒素試劑盒

3樓:索萊寶生物

內毒素是革蘭氏陰性菌細胞壁(cell wall)上的特有成分,主要是脂多糖中的類脂a,在細菌被裂解時被釋放出來,由於其化學結構和特性,在質粒的純化過程中很容易混入質粒dna一同提取出來。內毒素的存在會嚴重的影響質粒轉染細胞的效率,此外會啟用造血細胞(如b細胞、巨噬細胞等)的非特異免疫反應,造成實驗的假陽性,所以轉染級質粒的提取純化必須去除內毒素。

4樓:匿名使用者

有的大佬能夠手提質粒並去內毒素,得率也很高,這裡如果沒有太好的技術能力,可以使用kit來代替,我師兄用biog完全達到實驗需求了,和摸索實驗所耗費的時間金錢差不多吧,看個人選擇吧。

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