DNA的限制性酶切及電泳分析實驗方法

時間 2022-03-11 15:25:11

1樓:匿名使用者

不是很了解,我知道丁香園**會有介紹的

dna限制酶切和瓊脂糖凝膠電泳中常說的marker是什麼?還有loading dye 在實驗中起到什麼作用?

2樓:小蠻

dna的限制性酶切

限制性內切酶特異性地結合於一段被稱為限制酶識別序列的特殊dna序列之內或其附近的特異位點上,並在此處切割雙鏈dna。

loading buffer 的中文名字叫上樣緩衝液,6*的緩衝液中可以顯示兩條帶,前面的藍色的條帶是溴酚藍,代表的片段大小是 300bp,後面的有點綠色的條帶是二甲苯青,代表的片段大小在4000bp左右。   loading buffer的功能主要有兩個。第一,裡邊的指示劑溴酚藍和二甲苯酚起到指示的作用,顯示電泳的程序,以便我們適時終止電泳;第二,裡邊的成分甘油可以加大樣品密度,使樣品密度大於tae,從而沉降到點樣孔中,防止樣品飄出點樣孔。

另外,有的buffer是加有sds的,一般都會寫明。sds主要是促使聚合酶變性,因為沒有除盡的聚合酶會結合在dna雙鏈上影響它的遷移速率。細胞裂解後的裂解液,加loading 100℃加熱,也是為了中止酶促反應,防止提取的蛋白質降解。

loading dye 是跑瓊脂糖凝膠用來染dna的染料,它是和loading buffer按一定的比例混合而成的.有的進口試劑buffer裡已經加了loading dye的,就不用加了.試劑說明書都有說明的.

.瓊脂糖凝膠電泳marker是用來做參考的,類似於標尺的作用。

marker會跑出很多條帶,對應帶的片段長度是一定的(不

3樓:匿名使用者

1. 沒紫外線,確定電源完好?燈管都是好的? 2. 你的樣本加了螢光染料沒有?比如溴乙錠,或者sybr green。 你沒有染色吧……

4樓:貓太郎

1. marker是分子量標準 你要知道電泳時 分子量越小的跑得越快 這樣的你的酶切產物電泳後形成的條帶 就可以對照marker知道是多大分子量的了

2. loading dye 一般用溴酚藍或二甲苯青 和混在上樣緩衝液裡 和 樣品一起點到點樣孔中,電泳過程中 dye也會往前移動。在特定濃度的凝膠裡 dye的遷移率會和特定的分子量dna速度一樣。

目的是為了知道電泳跑到什麼時候可以停止,起指示作用的。 否則一大塊膠 沒有指示dye,你也不知道改跑到什麼時候 還得跑跑就得紫外照照

dna電泳圖結果分析

5樓:

挺好的。質粒酶切以後正好有和pcr產物一樣長度的片段,說明pcr產物成功轉殖到質粒裡面了。

6樓:匿名使用者

首先看第二泳道,能夠看見兩條帶,一般的質粒跑完電泳都是這種情況,因為質粒容易開鏈,變成線性的,或者是半線性半環狀,而環狀的比線性的跑的快,所以上面那條淺的應該是開鏈的質粒,下面的是環狀的質粒,不過不要緊,一般都是這樣。看第三條泳帶,說明你的目的條帶大約在750bp。再看第四個泳帶,靠近點樣孔的是你切掉了目的基因的質粒,此時為線性的質粒,能夠看見它比第二條泳道那條亮帶跑的要慢一些,這是對的結果。

還是因為環狀的比線性的跑的快。而第四條泳帶下面那個淺帶,是你的目的基因,它與你pcr產物大小一樣。因此說明了你的重組質粒構建成功,目的基因已經連入質粒了。

恭喜你!第一次做就能做成這樣,羨慕啊。

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