小鼠骨髓細胞染色實驗中有哪些材料可用作製備染色標本,其基本特性是什麼

時間 2021-08-11 17:28:44

1樓:匿名使用者

【基本原理】

在真核生物中, 染色體的數量和形態具有物種的特異性, 迄今一直可以此作為物種分類的基本依據之一。染色體作為遺傳物質-dna 的載體, 對生物的遺傳、變異、進化和個體發生, 以及細胞的增殖和生理過程的平衡控制等都具有十分重要的意義。每乙個物種的細胞一般都有一定數目、形狀和大小的染色體。

將體細胞核中全部染色體按照其大小、著絲粒位置,以至帶型有序地排列起來,此模式圖象排列即為核型(karyotype)或染色體組型。核型分析均是以中期染色體為標準,對製作出的染色體標本進行照相以獲得染色體的顯微圖象,並將其剪裁排列即成。華裔學者莊有興(joe hin tjio)和瑞典學者a.

levan 合作, 利用低滲法研究胎兒肺組織的染色體標本製做方法,終於在1956 年首次確定了人類的染色體數目是46 條,而不是前人所主張的48 條,這為後來的人類核型研究奠定了基礎。

自身正處於活躍**狀態或用植物血球凝集素(phytohemagglutinin,pha)處理後處於**狀態的組織或細胞,均可用於染色體標本的製作與分析。在正常動物體中,精巢和骨髓均為是活躍**的組織,可不經pha 處理直接用來製作染色體標本。但在取材方面,精巢又比骨髓要簡易一些。

骨髓細胞具有高度的**活性,經秋水仙素或秋水醯胺處理後,使**細胞阻斷在有絲**中期,再經低滲處理、固定、滴片、染色等步驟,可製作較好的骨髓細胞的染色體標本。對於骨髓染色體標本的製作,一般包括以下幾個要點:1)用一定劑量的秋水仙素破壞紡錘絲的形成,使細胞**停滯在中期,使中期染色體停留在赤道面處;2)用低滲法使將細胞膨脹,再經固定液固定,盡可能使染色體的結構保持不變,在滴片時細胞被脹破,使細胞的染色體鋪展到載片上;3)空氣乾燥法可使使細胞的染色體在載片上展平,經giemsa 染色後便可觀察到染色體的顯微圖象。

【方法步驟】

1.取青蛙,於實驗前7~8 小時,腹腔注射秋水仙素(按每克體重6 微克)。

2.處死青蛙,取其股骨及肱骨,去掉骨上的肌肉。

3.用骨剪將股骨頭的兩端剪去,用注射器吸取1ml0.075 mol/l 氯化鉀溶液;注入骨髓腔將骨髓洗出於刻度離心管中。

4.吹打分散細胞,靜置 20分鐘。

5.離心機離心(2000 轉/分鐘)5分鐘去上清.

6|. 加入新配製的卡諾固定液1ml固定20分鐘(甲醇3:冰醋酸1)。用吸管輕輕混勻進行預固定,然後以2000 轉/分鐘離心5 分鐘,棄去上清液。

7.加入新配固定液0.5毫公升(視細胞多少而定)製成細胞懸液,用吸管吸取細胞懸液,滴2~ 3 滴於預冷的載玻片上,並吹散細胞。將載玻片在酒精燈上微烤。再用電吹風將標本吹乾

(或空氣乾燥)。

8.滴giemsa 染液6~8 滴於載玻片上,室溫下染色3 分鐘左右,自來水沖洗,用電吹風吹乾(或空氣乾燥)。(注:雞染色體的製作方法基本相同)。

9.將製好的玻片標本在低倍鏡下觀察,然後換高倍鏡找到分散良好的**相,再轉油鏡仔細觀察。

【實驗結果】

在顯微鏡下,染色體被染成紫紅色,胞漿完全不著色。對於分散好的染色體, 其間相互散開, 短臂收縮適中, 二條姐妹染色單體大致平行分離, 著絲粒清晰可見。小鼠的染色體數為40 條,多為端部和亞端部染色體,只有2 對亞中部著絲粒染色體。

[附] 染色體標本製做質量不佳的可能原因:

1.秋水仙素用量太多或處理時間過長,都會導致染色體的過分縮短或著絲點迅速裂解,最終使染色體被破壞或溶解。

2.低滲處理極為重要,低滲液的量、處理時間均與細胞的數量有關。低滲過度時, 細胞會破裂,成膜上浮;不足時則染色體積在一起,因此,低滲處理直接影響染色體分散之好壞。

3.離心速度太高或離心時間過長。細胞團塊不易打散;速度過低或離心時間過短, 使 細胞不易沉降,會失去大量**相。

4.固定液要隨用隨配, 固定徹底後再打散細胞團塊, 否則細胞容易破碎, 染色體分散亦受到影響。

5.載玻片如有油脂或冷卻不夠亦影響的鋪展。

小鼠骨髓細胞的染色體標本一般製備成什麼片

2樓:匿名使用者

首先要提前2小時向小鼠注射秋水仙素,處死小鼠,剪下版四權肢,剔除肉等,剪碎骨,加生理鹽水,離心取細胞(離心管底部),再經低滲處理,染色,滴冰片,鏡檢.很麻煩,具體的你可以去圖書館查閱相關資料(動物染色體製備).

小鼠骨髓細胞染色體標本製備和觀察實驗報告

3樓:孤獨劍

首先要提前2小時向小鼠注射秋水仙素,處死小鼠,剪下四肢,剔除肉等,剪碎骨,加生理鹽水,離心取細胞(離心管底部),再經低滲處理,染色,滴冰片,鏡檢。很麻煩,具體的你可以去圖書館查閱相關資料(動物染色體製備)。

製備小鼠染色體標本時,秋水仙素,氯化鉀,乙醇,冰乙酸的作用分別是什麼?

4樓:無級

製備小數染色體標本是秋水仙素氯化鉀,以重編譯說的注意分別是?

5樓:騎良驥塗彤

秋水仙素是抑制紡錘體的形成;

氯化鉀是使細胞膨脹,有利於染色體更加均勻地分散在乙個平面上。

細胞生物學複習資料 要詳細的???

6樓:崔珉豪

名詞解釋:

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