你好,我們現在準備做菌落pcr,可以問一下你pcr時需不需要加石蠟油這種東西?還是其他物質啊

時間 2022-06-29 11:35:05

1樓:匿名使用者

不需要。但是菌液pcr需要在開始迴圈前加熱使菌體破裂,dna變性。所以最好選用hotstart pcr,一舉兩得。

2樓:匿名使用者

樓上的回答都比較籠統。

首先石蠟油現在已經極少用了。對於做e.coli等原核的菌落pcr不需要預先破菌,在95℃*5min的預變性過程中就能基本上破裂,讓dna釋放出來。

但是在做酵母或者其他真核菌落pcr時,僅僅95度5min的預變性不足以裂解,所以一般我們會用一種叫做lyse-n-go的試劑,只要成分是低濃度naoh,裂解細胞,然後做hot-start pcr,其實直接用低濃度naoh裂解也可以實現,我已經驗證過有效。lyse-n-go是thermo scietific公司的專利,具體protocol你去他們頁面查。http:

3樓:淘歌

以前是要加礦物油,現在的pcr基本不需要了。

已多年的經驗來看:你的熱蓋pcr儀,再加上又是菌做模板,p起來是很簡單的,此外,pcr的預變性過程也足夠裂解菌,不須什麼特別準備。

4樓:小蠻

要加。不然就蒸乾了,還會導致汙染~~~

5樓:匿名使用者

加不加要根據pcr是否有熱蓋功能,有這個功能就不需要加。菌落pcr就是為了簡便的看看有沒有目的基因存在,不用考慮過多,pcr基本成分都有就ok

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