細胞轉染後,再培養7或8天收集細胞,那麼長時間,細胞不就擠死了嗎

時間 2021-09-02 20:50:44

1樓:

細胞轉染可以:(1)真核細胞可以摻入外源dna而獲得新的遺傳標誌;(2)應用於轉基因動植物;(3)應用於生物製藥、基因**、rna干擾。

脂質體介導法

實驗原理

上圖所示是脂質體介導轉染的示意圖,它顯示了外源質粒進入細胞的一般過程。

外源基因進入細胞主要有四種方法:電擊法、磷酸鈣法和脂質體介導法和病毒介導法。電擊法是在細胞上短時間暫時性的穿孔讓外源質粒進入;磷酸鈣法和脂質體法是利用不同的載體物質攜帶質粒通過直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因進入細胞;病毒法是利用包裝了外源基因的病毒感染細胞的方法使得其進入細胞。

但是由於電擊法和磷酸鈣法的實驗條件控制較嚴、難度較大;病毒法的前期準備較複雜、而且可能對於細胞有較大影響;所以現在對於很多普通細胞系,一般的瞬時轉染方法多採用脂質體法。

利用脂質體轉染法最重要的就是防止其毒性,因此脂質體與質粒的比例,細胞密度以及轉染的時間長短和培養基中血清的含量都是影響轉染效率的重要問題,通過實驗摸索的合適轉染條件對於效率的提高有巨大的作用。

上圖是本次實驗採用的脂質體中陽離子組分的結構的示意圖。

本次實驗採用的脂質體是promega公司的transfast脂質體試劑,它是一種陽離子脂質體和中性脂質體的混合物,是對於本次實驗中採用的293t細胞優化的轉染試劑。

2樓:天道

細胞不會無限增殖的。。

加藥處理過的細胞需要培養很長時間怎麼辦?因為要培養4周左右,不知道傳代的話會不會有影響? 20

3樓:

你的藥物會不會影響細胞增殖? 可以用無血清培養基或者減少細胞數 藥物處理對細胞肯定是有影響的

4樓:

沒有處理過這麼久,如果換液的時候是換的加藥培養基,可能會使總藥物濃度增加,比如藥物已經進入細胞,你再換液,相當於再次作用,另外中途提蛋白?蛋白量怕是不夠吧,你的應該是貼壁細胞,刮蛋白怎麼刮?刮一半?

我很好奇

5樓:

加藥分批加不行麼,把藥量分一下,或者稀釋

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