1樓：匿名使用者
（1）質粒dna的質量和濃度：
用於轉化的質粒dna應主要是超螺旋態的，轉化率與外源dna的濃度在一定範圍內成正比，但當加入的外源dna的量過多或體積過大時，則會使轉化率下降。一般地，dna溶液的體積不應超過感受態細胞體積的5%，1ng的cccdna即可使50ul的感受態細胞達到飽和。對於以質粒為載體的重組分子而言，分子量大的轉化效率低，實驗證明，大於30kb的重組質粒將很難進行轉化。
此外，重組dna分子的構型與轉化效率也密切相關，環狀重組質粒的轉化率較分子量相同的線性重組質粒高10~100倍，因此重組dna大都構成環狀雙螺旋分子。
（2）感受態細胞的質量：
所用的cacl2等試劑均需是最高純度的，並用最純淨的水配製，最好分裝儲存於4℃
（3）細胞的生長狀態和密度
最好從-70℃或-20℃甘油儲存的菌種中直接轉接用於製備感受態細胞的菌液。不要用已經過多次轉接，及貯存在4℃的培養菌液。細胞生長密度以每毫公升培養液中的細胞數在5×107個左右為佳。
即應用對數期或對數生長前期的細菌，可通過測定培養液的od600控制。對tg1菌株，od600為0．5時，細胞密度在5×107個/ml左右。（應注意od600值與細胞數之間的關係隨菌株的不同而不同）。
密度過高或不足均會使轉化率下降。
（二）感受態細胞轉化中的影響：
整個操作過程均應在無菌條件下進行，所用器皿，如離心管，移液槍頭等最好是新的，並經高壓滅菌處理。所有的試劑都要滅菌，且注意防止被其它試劑、dna酶或雜dna所汙染，否則均會影響轉化效率或雜dna的轉入。整個操作均需在冰上進行，不能離開冰浴，否則細胞轉化率將會降低。
2樓：匿名使用者
用dh 10b好一些，只比dh5 α貴一點
轉化感受態細胞的目的是什麼轉化感受態細胞的前因後果
3樓：匿名使用者
感受態細胞指的是經處理後，處於能吸收周圍環境中dna分子生理狀態的微生物細胞，在轉基因技術操作過程中要將重組dna分子匯入微生物受體細胞時就需要用感受態細胞。所謂轉化是目的基因進入受體細胞並在受體細胞中維持穩定和表達的過程。（1）質粒dna的質量和濃度，環狀重組質粒的轉化率較分子量相同的線性重組質粒高10~100倍，則會使轉化率下降;ml左右，且注意防止被其它試劑。
（應注意od600值與細胞數之間的關係隨菌株的不同而不同），大於30kb的重組質粒將很難進行轉化：所用的cacl2等試劑均需是最高純度的。對tg1菌株。
所有的試劑都要滅菌。對於以質粒為載體的重組分子而言： 用於轉化的質粒dna應主要是超螺旋態的，並經高壓滅菌處理，1ng的cccdna即可使50ul的感受態細胞達到飽和。
一般地。細胞生長密度以每毫公升培養液中的細胞數在5×107個左右為佳，所用器皿，並用最純淨的水配製，細胞密度在5×107個/：整個操作過程均應在無菌條件下進行，分子量大的轉化效率低，移液槍頭等最好是新的，不能離開冰浴，重組dna分子的構型與轉化效率也密切相關，否則細胞轉化率將會降低，可通過測定培養液的od600控制、dna酶或雜dna所汙染，轉化率與外源dna的濃度在一定範圍內成正比。
密度過高或不足均會使轉化率下降。不要用已經過多次轉接。（二）感受態細胞轉化中的影響。
（2）感受態細胞的質量。整個操作均需在冰上進行，但當加入的外源dna的量過多或體積過大時，dna溶液的體積不應超過感受態細胞體積的5%，實驗證明，及貯存在4℃的培養菌液，因此重組dna大都構成環狀雙螺旋分子，最好分裝儲存於4℃ （3）細胞的生長狀態和密度 最好從-70℃或-20℃甘油儲存的菌種中直接轉接用於製備感受態細胞的菌液。即應用對數期或對數生長前期的細菌，否則均會影響轉化效率或雜dna的轉入，od600為0．5時，如離心管
感受態細菌轉化時需要多大的質粒濃度？
4樓：楊必宇
100-500ng/ul。質粒轉化不少於
bai10的du5次方，zhi連線產物不少於10的6次方。
兩種質粒dao是可以同時進入同乙個
版感受態細胞的，比如構建權腺病毒載體時。但是要求兩種質粒進入同乙個感受態細胞，轉化效率非常低，一般需要電轉或者其他的特殊處理。增加收菌次數，相對提高了質粒的量，這樣的話裂解液的量可以適當增加；裂解要充分，變性和復性按說明應該是不超過5分鐘，合理控制時間。
5樓：匿名使用者
質粒還是連線產物 質粒的話隨便一點點就可以了 多大濃度的都加1ul吧
6樓：匿名使用者
一般來說10~100ng都可抄
以，不過其襲實我們真正做的時候bai就是du不管濃度多大（濃度約zhi在100ng/ul以上），都是取dao1ul的質粒溶液，稀釋10倍，就是10ul,加入到100ul的感受態細胞裡~每次都這樣做，沒有問題
卡那黴素的質粒 用什麼感受態會好一些
7樓：
博凌科copy為生產的dh5а感受態細胞是採用大腸桿菌dh5а菌株經特殊工藝處理得到的感受態細胞，可用於dna 的化學轉化。
使用puc19 質粒檢測，轉化效率可達108 ，－70 ℃ 儲存幾個月轉化效率不發生改變。每支感受態可以酌情分裝使用，降低了實驗的成本。質。
構建氯黴素抗性的質粒，轉化什麼感受態細胞較好
切開的質粒能轉化進入感受態細菌嗎
8樓：勇強何
1、「切開的質粒」等於「線性dna」。
2、「線性dna轉化細菌、以及真菌的原生質體」已經成功。
所以，切開的質粒能轉化進入感受態細菌。但是，不能複製。如果質粒上帶有與細菌染色體上同源序列，質粒可以重組交換到細菌染色體上。例如構建突變或增加外源基因等。
9樓：匿名使用者
首先，切開的質粒是完全可能進入感受態細菌的，事實上所有的小分子態dna，rna都有可能進入任何細胞，但是你說能否轉化又是另一回事了，如果你的質粒斷在啟動子了，那麼就不能進行轉化了，而且斷的質粒很可能目的基因也斷了，第三：斷的質粒很不穩定，暴露的末端易遭受破壞。綜上：
也許切開的質粒確實能夠轉化細菌，但是這樣的可能性不大。
這樣的回答也許幫不了太大的忙，但卻是事實。呵呵。
感受態細胞的轉化要注意些什麼
10樓：匿名使用者
注意事項：
1．實驗中所需氯化鈣於冰浴後再使用
2．使用離心機前，要嚴格保證離心物品充分平衡，以免造成離心機損傷3．大腸桿菌感受態一定放冰上溶化
4．熱激和冰浴時間要科學把握
11樓：匿名使用者
此外（1）質粒dna的質量和濃度，環狀重組質粒的轉化率較分子量相同的線性重組質粒高10~100倍，則會使轉化率下降;ml左右，且注意防止被其它試劑。（應注意od600值與細胞數之間的關係隨菌株的不同而不同），大於30kb的重組質粒將很難進行轉化：所用的cacl2等試劑均需是最高純度的。
對tg1菌株。所有的試劑都要滅菌。對於以質粒為載體的重組分子而言：
用於轉化的質粒dna應主要是超螺旋態的，並經高壓滅菌處理，1ng的cccdna即可使50ul的感受態細胞達到飽和。一般地。細胞生長密度以每毫公升培養液中的細胞數在5×107個左右為佳，所用器皿，並用最純淨的水配製，細胞密度在5×107個/：
整個操作過程均應在無菌條件下進行，分子量大的轉化效率低，移液槍頭等最好是新的，不能離開冰浴，重組dna分子的構型與轉化效率也密切相關，否則細胞轉化率將會降低，可通過測定培養液的od600控制、dna酶或雜dna所汙染，轉化率與外源dna的濃度在一定範圍內成正比。密度過高或不足均會使轉化率下降。不要用已經過多次轉接。
（二）感受態細胞轉化中的影響。（2）感受態細胞的質量。整個操作均需在冰上進行，但當加入的外源dna的量過多或體積過大時，dna溶液的體積不應超過感受態細胞體積的5%，實驗證明，及貯存在4℃的培養菌液，因此重組dna大都構成環狀雙螺旋分子，最好分裝儲存於4℃ （3）細胞的生長狀態和密度 最好從-70℃或-20℃甘油儲存的菌種中直接轉接用於製備感受態細胞的菌液。
即應用對數期或對數生長前期的細菌，否則均會影響轉化效率或雜dna的轉入，od600為0．5時，如離心管
在裡連續腳注超過10以後的數字，怎麼用帶圓圈的符號表示
sky不用太多 主要是由於word軟體1 10有預設的設定好的帶圓圈的,11之後的沒有預設設定.因此你需要手動設定.從11至20帶圈的數字 246a 246b 246c 246d 246e 246f 2470 2471 2472 2473 在對應位置輸入前四位字元,選中字元 如 選中2473 按al...
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