瓊脂糖凝膠電泳的電壓設定成多少好?高了有什麼壞處嗎?
1樓:網友
首先要知道電壓高低對跑膠的影響,才能決定快慢嘛。
電壓高低是相對的,膠才是本質,電壓過高會因為發熱導致膠融化,跑太長時間marker會跑出去,甚至汙染電解液。
如果電壓相同,你配的膠肯定比配要跑的快嘛。
還有就是用途了,是分離樣品還是就觀察條帶,後者就可以跑快點嘛,有沒有東西一看就知道了。
快速跑膠秘籍:quick and dirty method)
把裝膠的溶液槽置於冰盒內跑,使冰塊包圍著裝置。看條帶的話140v,15min搞定,注意裝置一定要保持水平!
ps:師姐一般都比較保守,有問題當然要問師兄的哇,然後才好教師妹,是吧。
2樓:廖建本
120v跑半小時就行。電壓太高會造成溫度過高,但120v沒問題。
3樓:不憶楣
請教一下電泳槽是不是跟電源直接連線?
在做瓊脂糖凝膠電泳時,如果膠的濃度不合適,會發生什麼情況
4樓:網友
膠的濃度不合適,可能得不到凝膠,一接觸就碎了,既是沒有碎,在跑膠的時候,也許會跑的很快,分不開,或者跑不動,要重新做膠,自己摸索一下,書本上的濃度不一定就是對的,可能會因為你的那一種試劑質量不好,要多加一點,慢慢摸索一下。
5樓:網友
一般要根據要電泳分離的核酸的分子量大小:分子量大的核酸電泳時使用濃度較小的凝膠,分子量小的核酸電泳時使用濃度較大的凝膠。核酸在濃度越大的凝膠中電泳速度越小。
如果膠濃度偏高,可能跑不動,如果膠濃度偏低,可能跑得太快,分不開。
可以查到核酸分子大小與瓊脂糖濃度範圍的對應關係。
6樓:託託小俠客
根據分子量的大小選擇膠的濃度。
瓊脂糖凝膠電泳跑成這樣是怎麼回事
7樓:佟珍勢夏
根據我多年的經驗,少年,你的膠背景亮說明你的uv開得太亮了,正常時候不需要這麼強光就能看到條帶。
從你膠的樣子可以看出,你跑膠的時間太長了,看樣子你用的是sybr
green,這種染料在你電泳的時候是會向條帶相反方向移動的,跑時間太長,造成你的膠這樣下面一部分已經看不到marker和背景亮光了。而過長時間跑膠造成的溫度公升高(拿在手裡熱乎乎的軟軟的,聽起來像便便。。。使膠中的樣品和染料很多都擴散出去了,造成你的maker和條帶整個的不夠亮。
從你marker的位置可可以看出你跑膠的時間很長,因為最大的條帶的位置比較低了。
即使你的背景這麼強,也可以看出在你樣品孔的下方很近的地方有條帶,我不知道你樣品的大小和**,但是可以給出以下幾個可能原因:
你的loading
buffer不正確,造成樣品條帶異常移動。
最可能原因是你的樣品中dna就那麼大。如果你是提取質粒的話,你做錯某步,把細菌的核dna提取出來了,所以才那麼大。你做錯的可能是裂解那步,裂解時間超過5分鐘了或者你劇烈混合裂解液和細菌了,只有invert就可以了。
你上樣量也要保證,測一下濃度,一般200ng的條帶就非常亮了。
跑膠時候,電壓一般80-120,可以低,也可以高到200,但是室溫下推薦80-100。時長20-60分鐘為宜,一般推薦30分鐘,不過你可以跑一段時間拿出來uv照一下,這時候你可以看到條帶,如果分得不夠開,再放回去跑一會就好了。如果實在需要長時間跑,放4度跑。
8樓:北京索萊寶科技****
電泳出現拖尾現象,就是彌散。其原因,主要從以下兩個方面考慮:
1、pcr產物自身原因:
往往由於酶量過多或酶的質量差,dntp濃度過高,mg2+濃度過高,退火溫度過低,迴圈次數過多,而造成pcr的非特異性產物 過多。
對策:①減少taq酶的量,或調換另一**的酶。②減少dntp的濃度。③適當降低mg2+濃度。④增加模板量,減少引物的用量 ,減少迴圈次數,提高退火溫度。
2、電泳體系的問題:
1)電泳緩衝液tae或者tbe的汙染,建議更換緩衝液。(2)上樣時樣品漂了,建議增加上樣緩衝液的用量,以及小心加樣。(3)電壓太高。
4)適當把你的膠的濃度加大。(根據你的片斷大小而定)(5)觀察你的marker是否也存在拖尾現象,作為對照。
跑凝膠電泳如何確定每個孔的上樣量?
9樓:大西洋季風
凝膠電泳每個孔的加樣量都是一致的,如果不一致,需要換算,marker按照需求新增。
有條件的話留一道空白的,注意別飄樣就可以了。
歡迎追問,求採納。
凝膠電泳加入goldview的量過少會怎樣
10樓:網友
前一基納陣子實驗室開始使用一種新的核酸染料-goldview,取代原先用的溴化乙錠現在是由賽百盛**。以下摘自官方**: goldviewtm 核酸染料——使用說明 概 述 goldviewtm是一種可代替溴化乙錠(eb)的新念鋒遊仔銷型核酸染料,採用瓊脂糖電泳檢測dna。
跑瓊脂糖凝膠時,加了loading buffer,為什麼看不到指示劑的條帶?
11樓:網友
loading buffer不是指示劑啊,它的作用是幫助你的樣品進入加樣孔的,有時候如果你電泳時間短的話是可以看到溴酚藍前緣的,但如果時間較長,它就跑出去了,你是看不到的,電泳的時候起指示作用的應該加marker吧。
12樓:網友
以前用過嗎?
可以嘗試多加點,或是換一種loading buffer再試一下。
一般來說商業化的loading buffer都沒有什麼問題。
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