如果過氧化氫在免疫組化中乾掉了怎麼辦

時間 2021-09-04 05:46:04

1樓:

再滴加新的過氧化氫溶液就可以了。過氧化氫的作用是封閉組織中的過氧化物酶,只要達到封閉的目的就可以不影響染色結果。

最好使用低濃度的過氧化氫酶,這樣不容易揮發。

2樓:匿名使用者

雙氧水是實驗室制氧氣的試劑。

過氧化氫(化學式:h2o2),純過氧化氫是淡藍色的黏稠液體,可任意比例與水混溶,是一種強氧化劑,水溶液俗稱雙氧水,為無色透明液體。其水溶液適用於醫用傷口消毒及環境消毒和食品消毒。

在一般情況下會緩慢分解成水和氧氣,但分解速度極其慢,加快其反應速度的辦法是加入催化劑——二氧化錳。這就是實驗室制氧氣的方法。

在不同情況下有氧化作用和還原作用。用於照相除汙劑;彩色正片藍色減薄;軟片超比例減薄等。極易分解,不易久存。

氧化性。

還原性,和氯氣、高錳酸鉀等強氧化劑反應被氧化生成氧氣。

遇有機物、受熱分解放出氧氣和水,遇鉻酸、高錳酸鉀、金屬、碳酸反應劇烈。為了防止分解,可以加入微量的穩定劑,如錫酸鈉、焦磷酸鈉等等。

純過氧化氫很不穩定,加熱到153 °c便猛烈的分解為水和氧氣。

希望我能幫助你解疑釋惑。

免疫組化的操作步驟

3樓:力翠荷

一 免疫組化(sp法)操作步驟

1. 切片常規脫蠟至水。如需抗原修復,可在此步後進行

2.緩衝液洗 3min/2 次。

3. 為了降低內源性過氧化物酶造成的非特異性背景染色,將切片放在 hydrogen peroxide block 中孵育 10-15 分鐘。

4. 緩衝液洗 5min/2 次。

5. 滴加 ultra v block , 在室溫下孵育 5 分鐘以封閉非特異性的背景染色。

(注:孵育不要超過 10 分鐘,否則會導致特異性染色降低。如果一抗的稀釋液中含有 5 - 10% 正常羊血清,這一步可以省略。)

6. 緩衝液洗 5min/2 次。

7. 滴加一抗工作液 37 ℃孵育 1 - 2 小時。(具體孵育時間和溫度由試驗者最終決定)

8. 緩衝液洗 5min/2 次。

9 . 滴加 primary antibody enhancer(增強子),在室溫下孵育 20 分鐘。

10 .緩衝液洗 5min/2 次。

11 .滴加 hrp polymer(酶標二抗) ,在室溫下孵育 30 分鐘。

(注:hrp polymer 對光敏感,應避免不必要的光暴露並儲存在不透明的小瓶中。)

12 .緩衝液洗 5min/2 次。

13 .向 1ml dab plus substrate (或 aec plus substrate) 中滴加 1-2 滴 dab plus chromogen (或 aec plus chromogen),混勻後滴加到切片上,孵育 3 - 15 分鐘。(具體時間由染色深淺決定。)

14 .自來水充分沖洗,復染,脫水,透明,封片。 ⑴、石蠟切片脫蠟至水。

⑵、 3%h 2 o2 室溫孵育 5-10 分鐘,以消除內源性過氧化物酶的活性。

⑶、蒸餾水沖洗, pbs 浸泡 5 分鐘 x2 (如需抗原修復,可在此步後進行)。

⑷、 5-10% 正常山羊血清(pbs 稀釋)封閉,室溫孵育 10 分鐘,傾去血清,勿洗。滴加 一抗 工作液, 37 ℃ 孵育 1-2 小時或 4 ℃ 過夜。

⑸、 pbs 沖洗, 5 分鐘 x3 次。

⑹、滴加適量 生物素標記二抗 工作液, 37 ℃ 孵育 10-30 分鐘。

⑺、 pbs 沖洗, 5 分鐘 x3 次。

⑻、滴加適量的 辣根酶或鹼性磷酸酶標記的鏈黴卵白素 工作液, 37 ℃ 孵育 10-30 分鐘。

⑼、 pbs 沖洗, 5 分鐘 x3 次。

⑽、顯色劑顯色 3-15 分鐘(dab 或 nbt/bcip)

⑾、自來水充分沖洗,復染,脫水,透明,封片。 冰凍切片 4-8μm ,室溫放置 30 分鐘後,入 4 ℃丙酮固定 10分鐘,pbs洗,5分鐘x3,用過氧化氫孵育5-10分鐘,消除內源性過氧化物酶的活性。

4樓:吹西麥格瑞迪

1. 切片常規脫蠟至水。如需抗原修復,可在此步後進行

2.緩衝液洗 3min/2 次。

3. 為了降低內源性過氧化物酶造成的非特異性背景染色,將切片放在 hydrogen peroxide block 中孵育 10-15 分鐘。

4. 緩衝液洗 5min/2 次。

5. 滴加 ultra v block , 在室溫下孵育 5 分鐘以封閉非特異性的背景染色。

(注:孵育不要超過 10 分鐘,否則會導致特異性染色降低。如果一抗的稀釋液中含有 5 - 10% 正常羊血清,這一步可以省略。)

6. 緩衝液洗 5min/2 次。

7. 滴加一抗工作液 37 ℃孵育 1 - 2 小時。(具體孵育時間和溫度由試驗者最終決定)

8. 緩衝液洗 5min/2 次。

9 . 滴加 primary antibody enhancer(增強子),在室溫下孵育 20 分鐘。

10 .緩衝液洗 5min/2 次。

11 .滴加 hrp polymer(酶標二抗) ,在室溫下孵育 30 分鐘。

(注:hrp polymer 對光敏感,應避免不必要的光暴露並儲存在不透明的小瓶中。)

12 .緩衝液洗 5min/2 次。

13 .向 1ml dab plus substrate (或 aec plus substrate) 中滴加 1-2 滴 dab plus chromogen (或 aec plus chromogen),混勻後滴加到切片上,孵育 3 - 15 分鐘。(具體時間由染色深淺決定。

)14 .自來水充分沖洗,復染,脫水,透明,封片。

簡介:免疫組化,是應用免疫學基本原理--抗原抗體反應,即抗原與抗體特異性結合的原理,通過化學反應使標記抗體的顯色劑(螢光素、酶、金屬離子、同位素)顯色來確定組織細胞內抗原(多肽和蛋白質),對其進行定位、定性及相對定量的研究,稱為免疫組織化學技術(immunohistochemistry)或免疫細胞化學技術(immunocytochemistry)。

基本原理:

抗體和抗原之間的結合具有高度的特異性,免疫組織化學正是利用了這一原理。先將組織或細胞中的某種化學物質提取出來,以此作為抗原或半抗原,通過免疫動物後獲得特異性的抗體,再以此抗體去探測組織或細胞中的同類的抗原物質。由於抗原與抗體的複合物是無色的,因此還必須借助於組織化學的方法將抗原抗體結合的部位顯示出來,以其達到對組織或細胞中的未知抗原進行定性,定位或定量的研究。

5樓:匿名使用者

一 免疫組化( lp 法)操作步驟 :

1. 切片常規脫蠟至水。如需抗原修復,可在此步後進行

2. 緩衝液洗 3min/2 次。

3. 為了降低內源性過氧化物酶造成的非特異性背景染色 , 將切片放在 hydrogen peroxide block 中孵育 10-15 分鐘。

4. 緩衝液洗 5min/2 次。

5. 滴加 ultra v block , 在室溫下孵育 5 分鐘以封閉非特異性的背景染色。

(注:孵育不要超過 10 分鐘,否則會導致特異性染色降低。如果一抗的稀釋液中含有 5 - 10% 正常羊血清,這一步可以省略。)

6. 緩衝液洗 5min/2 次。

7. 滴加一抗工作液 37 ℃孵育 1 - 2 小時。(具體孵育時間和溫度由試驗者最終決定)

8. 緩衝液洗 5min/2 次。

9 . 滴加 primary antibody enhancer( 增強子 ) , 在室溫下孵育 20 分鐘。

10 .緩衝液洗 5min/2 次。

11 .滴加 hrp polymer( 酶標二抗 ) ,在室溫下孵育 30 分鐘。

(注: hrp polymer 對光敏感,應避免不必要的光暴露並儲存在不透明的小瓶中。)

12 .緩衝液洗 5min/2 次。

13 .向 1ml dab plus substrate ( 或 aec plus substrate) 中滴加 1-2 滴 dab plus chromogen (或 aec plus chromogen ) , 混勻後滴加到切片上,孵育 3 - 15 分鐘。(具體時間由染色深淺決定。)

14 .自來水充分沖洗 , 復染,脫水 , 透明 , 封片。

二.免疫組化 ( 三步法 ) 操作步驟 :

( 1 )、石蠟切片脫蠟至水。

( 2 )、 3%h 2 o 2 室溫孵育 5-10 分鐘,以消除內源性過氧化物酶的活性。

( 3 )、蒸餾水沖洗, pbs 浸泡 5 分鐘 x2 (如需抗原修復,可在此步後進行)。

( 4 )、 5-10% 正常山羊血清( pbs 稀釋)封閉,室溫孵育 10 分鐘,傾去血清,勿洗。滴加 一抗 工作液, 37 ℃ 孵育 1-2 小時或 4 ℃ 過夜。

( 5 )、 pbs 沖洗, 5 分鐘 x3 次。

( 6 )、滴加適量 生物素標記二抗 工作液, 37 ℃ 孵育 10-30 分鐘。

( 7 )、 pbs 沖洗, 5 分鐘 x3 次。

( 8 )、滴加適量的 辣根酶或鹼性磷酸酶標記的鏈黴卵白素 工作液, 37 ℃ 孵育 10-30 分鐘。

( 9 )、 pbs 沖洗, 5 分鐘 x3 次。

( 10 )、顯色劑顯色 3-15 分鐘( dab 或 nbt/bcip )

( 11 )、自來水充分沖洗,復染,脫水,透明,封片。

三. 冰凍切片免疫組化染色步驟:

冰凍切片 4-8um ,室溫放置 30 分鐘後,入 4 ℃丙酮固定 10分鐘,pbs洗,5分鐘x3,用過氧化氫孵育5-10分鐘,消除內源性過氧化物酶的活性。以下同石蠟切片免疫組化

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