1樓：許建設扈錦
dna的粗提取
①準備材料
將新鮮菜花和體積分數為95%的酒精溶液放入冰箱冷凍室,至少24
h。②取材
稱取30
g菜花,去梗取花,切碎。
③研磨將碎菜花放入研缽中,倒入10
ml研磨液,充分研磨10
min。
④過濾在漏斗中墊上尼龍紗布,將菜花研磨液濾入燒杯中(有條件的學校可將濾液倒入塑料離心管中進行離心,用1
000r/min的旋轉頻率,離心25
min,取上清液放入燒杯中)。在4
℃冰箱中放置幾分後,再取上清液。
⑤加冷酒精
將一倍體積的上清液倒入兩倍體積的體積分數為95%的冷酒精溶液中,並用玻璃棒緩緩地輕輕攪拌溶液(玻璃棒不要直插燒杯底部)。沉澱35
min後,可見白色的dna絮狀物出現。用玻璃棒緩緩旋轉,絮狀物會纏在玻璃棒上。
(2)dna的鑑定
①配製二苯胺試劑
取0.1
mlb液,滴入到10
mla液中,混勻。
②鑑定取4
mldna提取液放入試管中,加入4
ml二苯胺試劑,混勻後觀察溶液顏色(不變藍)。用沸水浴(100
℃)加熱10
min。在加熱過程中,隨時注意試管中溶液顏色的變化(逐漸出現淺藍色)。
研磨液的配製方法
tris：10.1
g(相對分子質量為121.14),先加50
ml蒸餾水溶解,用物質的量濃度為2
mol/l
的鹽酸調至ph8.0,再加下述藥品。
nacl：8.76
g(相對分子質量58.44)
edta：37.2
g(相對分子質量372.24)
sds：20
g(相對分子質量288.3)
待上述藥品全部溶解後,再用蒸餾水定容至1
000ml。
若在室溫低於20
℃時配製藥液,sds呈沉澱析出,此時需要加溫,才能將sds溶解。如果提前配製的研磨液出現了沉澱,則應加溫使沉澱溶解後再使用。
研磨液中幾種藥品的作用
sds(十二烷基磺酸鈉):可使蛋白質變性,與dna分離。
edta(乙二胺四乙酸二鈉):為dna酶的抑制劑,可以防止細胞破碎後dna酶降解dna。
物質的量濃度為0.15
mol/l的氯化鈉溶液：能很好地溶解dna。
tris/hcl：提供緩衝體系,dna在這個緩衝體系中呈穩定狀態。(tris為三羥甲基氨基甲烷)
鑑定dna的其他方法
用紫外燈照射法鑑定dna效果很好。具體鑑定方法如下。
1.配製染色劑。用蒸餾水配製萬分之五的溴化乙錠(eb)溶液。
2.將玻璃棒上纏繞的白色絮狀物抹於蠟紙上,再滴1滴eb溶液染色。
3.將蠟紙放在紫外燈(260
nm)下照射(暗室中),可見橙紅色的螢光(dna的紫外吸收高峰在280
nm處)。
o(∩_∩)o~
2樓：愛玩評測
這個太專業了，你最好問一下專業人士。
3樓：小乖乖小鬧鬧
可以用biog提取方法如下
1. 請自行準備：無水乙醇、1.5ml離心管。
2. 取出析出液和洗滌液，按以下操作：
a) 析出液：21ml加入9ml無水乙醇；42ml加入18ml無水乙醇。
b) 洗滌液：9ml加入21ml無水乙醇；18ml加入42ml無水乙醇。
c) 配製好的洗滌液如出現沉澱，可在37℃溶解，搖勻後使用。
3. 取10-20mg左右的組織，用液氮研磨為粉末，轉入1.5ml 離心管內，加入100 μl 生理鹽水（或直接在100 μl 生理鹽水中將組織勻漿為細胞懸液），振盪15秒；加入200 μl 裂解液， 20μl消化液a，振盪混勻，室溫放置5分鐘。
4. 加入20 μl 消化液b，充分混勻；56℃水浴60分鐘至組織完全消化，5000rpm離心5分鐘，將上清吸至1.5ml 離心管。
5. 加入200μl無水乙醇，輕輕顛倒混勻，如有半透明懸浮物，不影響dna的提取與後續實驗。
6. 將吸附柱放入收集管內，將上述溶液轉入吸附柱內，靜置2 分鐘，12,000 rpm 4℃離心1 分鐘，棄收集管內廢液。
7. 將吸附柱放**集管內，加500μl 洗滌液a至吸附柱內，12,000 rpm 4℃離心1 分鐘，棄收集管內廢液。
8. 將吸附柱放**集管內，加500μl 洗滌液b至吸附柱內，12,000 rpm 4℃離心1 分鐘，棄收集管內廢液。
9. 將吸附柱放**集管內，12,000 rpm 4℃離心2 分鐘，離去殘留的洗滌液。
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