1樓：大俠劍指天
雙酶切，然後做ligase連線就好。連線的過程中會出現很多突變。
然後你把連線的產物做轉化。如果有條件可以使用電激轉化，這個轉化的效率非常點（連線產物本來就不多，突變又多）。如果條件不夠就用熱激轉化，熱激轉化的效率低一些，不如電激轉化好。
千萬不要用tss轉化（效率太低了，只能用成型的質粒）。
轉化之後你要挑選菌落，去做測序（一般交給公司），因為突變很多，一定要測序到完全正確的序列。如果沒有測到，就繼續挑選菌落。如果菌落挑完了，就重新轉化。
這段時間要多扶老太太過馬路哦。
等到你得到了好的菌落，就可以培養它，提取質粒。這個量就很大了。
給你個簡單的protocol
pcr 你的基因
對pcr產物，和空質粒，同時使用雙酶切（分開的），加入合適的nebuffer
使用t4ligase 和buffer 常溫1小時或者16度過夜 連線。
熱激轉化（電激轉化還有clean脫鹽）
挑去菌落
提取dna 測序（（（得到了你要的哦）））
選定菌落，液氮儲存
2樓：葉綠蛋白
能。實際上大家正是這麼做的。
將一個目的基因連線到質粒上，一般用兩種dna內切酶做雙酶切，使目的基因和被切開的質粒片段兩端都有特異性的粘性末端，然後用dna連線酶把目的基因與質粒片段連起來。
然後將重組質粒轉化進感受態的細菌細胞中去（一般用熱激法）。
由於選用的質粒上一般帶有某種抗生素抗性基因（最常見的是抗氨苄青黴素抗性基因）。因此轉化後的細菌沒有吸收上質粒的都不能在加有相應抗生素的平板上生存。
然後在平板上挑選幾個單克隆菌落進行擴增培養，質粒（以及其上的重組基因）會隨著細菌的擴增而擴增。
用擴增好的菌液來抽提質粒就得到比原先多得多的目的基因拷貝數。如果用的是合適的菌種，那些菌液還可以用來誘導表達相應的蛋白質（假設這是編碼原核生物蛋白的基因或者是用cdna整出來的而且能在原核生物正常表達的基因）。
如果擴增出來的質粒沒有重組基因怎麼辦？對抽提出來的質粒進行dna測序就知道有沒有重組基因在裡面了。有時候序列會有突變，這跟選用的菌株有關，比如說jm109菌株比起dh5α菌株就較不容易讓質粒序列產生突變。
一般人運氣不會差到5個單克隆菌落裡面都沒有一個有的，除非是酶切技術有問題。
我想成立一個網路工作室，請各位高人給我起個好聽霸氣的名字。 40
3樓：匿名使用者
巨集晟科技工作室，希望可以幫助到你望採納噢謝謝。
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4樓：匿名使用者
royal feeling 尊貴感覺
rainbow family 彩虹之家
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5樓：雨季的夏末
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6樓：匿名使用者
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7樓：匿名使用者
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8樓：掛在樹上的月亮
romantic forever
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