抗生素效價測定的方法有哪兩類?它們各有什麼特點

時間 2021-09-08 19:41:50

1樓:營媛女陰琛

抗生素的效價常採用微生物學方法測定,它是利用抗生素對特定的微生物具有抗菌活性的原理來測定抗生素效價的方法,如管碟法(cylinder

plate

method)。管碟法是根據抗生素在瓊脂平板培養基中的擴散滲透作用,比較標準品和檢品兩者對試驗菌的抑菌圈大小來測定供試品的效價。管碟法的基本原理是在含有高度敏感性試驗菌的瓊脂平板上放置小鋼管(內徑6.

0±0.lmm,外徑8.0±0.

lmm,高10±0.lmm),管內放入標準品和檢品的溶液,經16~18小時恆溫培養,抗生素擴散的有效範圍內則產生透明的無菌生長的區域,常呈圓形,稱為抑菌圈(圖實驗-18)。抑菌圈直徑大小與抗生素濃度相關,比較抗生素標準品與檢品的抑菌圈大小,可計算出抗生素的效價。

抗生素效價常採用二劑量法。將抗生素標準品和供試品各稀釋成一定濃度比例(2:1或4:

1)的兩種溶液,在同一平板上比較其抗藥活性,再根據抗生素濃度對數和抑菌圈直徑成直線關係的原理來計算供試品效價。取含菌層的雙層平板培養基,每個平板表面放置4個小鋼管,管內分別放入檢品高、低劑量和標準品高、低劑量溶液。先測量出四點的抑菌圈直徑,按下列公式計算出檢品的效價。

(1)求出w和v:

(2)w=(sh+uh)-(sl+ul)

(3)v=(uh+ul)-(sh+sl)

式中:uh:供試品高劑量之抑菌圈直徑

ul:供試品低劑量之抑菌圈直徑

sh:標準品高劑量之抑菌圈直徑

sl:標準品低劑量之抑菌圈直徑

求出θ:(2)

θ=d·antilog(iv/w)式中:

θ:供試品和標準品的效價比

d:標準品高劑量與供試品高劑量之比,一般為1

i:高低劑量之比的對數,即log2或log4。

求出pr

:(5)pr=

ar×θ

式中:pr:供試品實際單位數

ar:供試品標示量或估計單位

(1)細菌:短小芽胞桿菌[cmcc(b)63202]的芽胞懸液。

(2)培養基:效價檢定用培養基(上層、底層)。

(3)抗生素:抗生素檢品及標準品(高劑量、低劑量,高劑量與低劑量之比為2:1)。

(4)試劑與器材:滅菌生理鹽水,無菌平皿,牛津杯,無菌吸管,鑷子,滴管,直尺。

(1)取無菌平皿,加入20ml底層培養基,凝固後作為底層。

(2)用滅菌生理鹽水將短小芽胞桿菌的芽胞懸液稀釋至一定濃度以能得到清晰的抑菌圈,且標準品高濃度所得抑菌圈直徑在18~22mm為基準。用無菌吸管吸取1ml芽胞懸液,加入到200ml恆溫於50℃的上層培養基中搖勻,迅速以無菌吸管吸取5ml,注入到底層培養基上,鋪平待凝。

(3)在平板底部四邊,分別對角註明“sh”、“sl”

和“uh”、“ul”標記。

(4)鑷子火焰滅菌3次,然後夾取4個牛津杯垂直放置在平板中標誌附近(注:勿使鋼管陷入培養基內,各小杯之間儘量等距)。

(5)以無菌滴管分別在每個牛津杯內加入相應的抗生素溶液至滿但不溢位管外,且四杯內液麵高度相同,蓋上平皿蓋,靜置30分鐘。

(6)將平皿置於37℃恆溫培養箱培養16~18

h,量取各抑菌圈直徑(sh、sl、uh、ul),以毫米為單位,誤差不超過0.1mm。

(7)計算抗生素效價

(8)查放線圖計算抗生素效價

2樓:夏年已逝

生物學法、化學及物理化學方法:

生物學法:測定方法原理與臨床應用的要求一致,更能夠確定抗生素的醫療價值,靈敏度高,需用供試品量少,既適用於精製品,也適用於純度差的製品,對同一型別抗生素無需分離,可一次測量總效價。

化學及物理化學法:對於提高產品以及化學結構已確定的抗生素可測定效價,有較高的專屬性。但也有不足:

不適用於含有雜質的供試品,所測結果往往只代表藥物總的含量,並不一定代表抗生素的生物效價。

抗生素效價測定的主要環節有哪些

3樓:淵源

(1)取無菌復平皿,加入20ml底層制培養基,凝固後bai作為底層。

(2)用滅du菌生理zhi鹽水將短小芽胞桿菌的芽dao胞懸液稀釋至一定濃度以能得到清晰的抑菌圈,且標準品高濃度所得抑菌圈直徑在18~22mm為基準。用無菌吸管吸取1ml芽胞懸液,加入到200ml恆溫於50℃的上層培養基中搖勻,迅速以無菌吸管吸取5ml,注入到底層培養基上,鋪平待凝。

(3)在平板底部四邊,分別對角註明“sh”、“sl” 和“uh”、“ul”標記。

(4)鑷子火焰滅菌3次,然後夾取4個牛津杯垂直放置在平板中標誌附近(注:勿使鋼管陷入培養基內,各小杯之間儘量等距)。

(5)以無菌滴管分別在每個牛津杯內加入相應的抗生素溶液至滿但不溢位管外,且四杯內液麵高度相同,蓋上平皿蓋,靜置30分鐘。

(6)將平皿置於37℃恆溫培養箱培養16~18 h,量取各抑菌圈直徑(sh、sl、uh、ul),以毫米為單位,誤差不超過0.1mm。

(7)計算抗生素效價。

(8)查放線圖計算抗生素效價。

測定抗生素效價的生物學定量方法是什麼?

4樓:中地數媒

瓊脂擴散法又稱圓筒平板法。用於測定抗生素效價的生物學定量方法之一。標準的方法是以20毫升的瓊膠培養基放入陪替氏培養皿內做成平面,上面加上預先培養的試驗標準菌種,例如摻入了葡萄球菌的瓊膠4毫升,而使之凝固,上面再放上一個外徑8毫米的不鏽鋼圓筒,筒內倒滿青黴素稀釋液之後,在35~37℃培養12~16小時。

由於圓筒周圍產生濃度梯度,葡萄球菌的繁殖被阻止於有效濃度範圍之內而形成圓形的透明帶。其直徑d與青黴素濃度c之間的關係如下式所示:

d=klog10c+a(k、a為常數)

與標準青黴素液相比較,可求得青黴素濃度。測定鏈黴素時用枯草菌,氯黴素用大腸菌,四環素用八連球菌作繁殖試驗。此外還有用圓形濾紙代替圓筒,使被檢液滲入的濾紙法。

測定抗生素效價時必須使用什麼?

5樓:左丘秀梅容書

建議: 管碟法是國內外常用的抗生素微生物檢定法[1],利用管碟法測定抗生素效價,具有準確、直觀、重複性好等優點,因而被廣泛採用。但是整個試驗過程中影響結果的因素很多,任何一個環節操作不當或者忽略就會造成很大誤差,導致整組試驗失敗。

6樓:止舒梅曼冬

培養皿、瓊脂培養基、試驗菌、牛津杯(鋼管)、滴灌、天枰、容量瓶、恆溫箱、遊標卡尺。

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